RNA总浓度可以通过比色法或者光学密度测量法来计算。
具体步骤如下:
1. 准备工作:首先,将RNA样本制备好,并确保取样的准确性和纯度。
2. 比色法:将制备好的RNA样本加入缓冲液中,使其达到一定的浓度范围。然后,使用比色试剂与RNA中的核酸结合,形成复合物。复合物的浓度与其吸收的光密度呈线性关系。通过比较吸光度与标准曲线,可以计算出RNA的浓度。
3. 光学密度测量法:利用光学密度测量仪器(如分光光度计)测量RNA溶液在特定波长下的吸光度。然后,使用Lambert-Beer定律,将吸光度值与RNA的浓度进行相关计算。需要注意的是,不同的测量方法可能会有一定的误差,因此在进行浓度计算时需要对标准曲线进行验证和校正,以提高结果的准确性。
RNA浓度通常计算为1OD =40μg/ ml。将2μl样品稀释至200μl,稀释倍数为100x,因此提取的RNA浓度为0.154×100×40μg/ ml =616μg/ ml。由于RNA量为50μl,提取的RNA总量为616μg/ ml×50 / 1000ml =30.8μg。扩展资料计算原理:蛋白中trp、tyr、phe的吸光度为280nm,所以280nm常用来表示蛋白质吸光度;而260nm为DNA的吸光度。
理论上,纯的RNA情况下:OD260/OD280的值为2,纯的DNA情况下:OD260/OD280的值为1.8。OD260反映的是溶液中核酸的浓度,OD280反映的是溶液中蛋白质或者氨基酸的浓度。
样品中如果含有蛋白质及苯酚,A260/A280比值会明显下降。
对于纯的样品只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。
通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA,或者40微克/ml 单链DNA,RNA,或者20微克/ml 寡核苷酸计算。