当目的基因发生基因突变时,PCR 扩增可以按照以下一般步骤进行:
1. 设计特异性引物:根据目的基因的序列信息,设计合适的引物。
引物应特异性地针对目的基因的突变区域或上下游序列。
2. PCR 反应条件优化:选择适当的 PCR 反应条件,如温度、时间、循环次数等。可能需要进行一些实验优化来确保突变区域能够有效地扩增。
3. 模板制备:准备含有目的基因的模板,可以是基因组 DNA、cDNA 或其他适当的模板来源。
4. PCR 扩增:按照常规的 PCR 方法进行扩增。在反应体系中加入模板、引物、dNTP、...