胶回收产物浓度在0.03pmol/ul浓度属于正常。
胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性(电荷)和疏水性使DNA与柱子结合。因此,若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);为了使DNA分子更好的拦截在膜上,可以添加30%异丙醇在加热溶解胶后的液体里。将柱子在室温放置几分钟(大约需10分钟),以使乙醇充分挥发。少加些洗脱液,尽量减少回收体积,一般用30-50μl洗脱液洗脱(不能太少,否则无法浸湿膜反而不利于洗脱)。洗脱液滴在膜中央,以充分洗脱结合在膜上的DNA。胶回收产物介绍:如果要胶回收,最好还是用试剂盒,方便,回收率也略高。实在要手工回收,可以切胶后加入3倍体积TE,水浴熔化,酚、酚/氯仿抽提干净,乙醇沉淀即可。如果PCR扩增特异性好,只是简单的PCR产物纯化回收。可以在PCR产物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯仿抽提一次,氯仿抽提一次,上清加入0.1体积的醋酸钠,2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
酶能解开的质粒在微克级别,跑胶一般肉眼能看到的是在纳克级别.胶回收的回收效率一般达到50%就不错了,回收肯定会有损失.个人经验还是浓度大一些比较好